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アイテム
組換えバキュロウイルスによる乳酸脱水素酵素ウイルスORF6蛋白の発現と性状
https://repo.qst.go.jp/records/67681
https://repo.qst.go.jp/records/6768157d8f476-ceaf-41a2-85b1-e64cdfb79286
| Item type | 会議発表用資料 / Presentation(1) | |||||
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| 公開日 | 2003-12-18 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | 組換えバキュロウイルスによる乳酸脱水素酵素ウイルスORF6蛋白の発現と性状 | |||||
| 言語 | ||||||
| 言語 | jpn | |||||
| 資源タイプ | ||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_c94f | |||||
| 資源タイプ | conference object | |||||
| アクセス権 | ||||||
| アクセス権 | metadata only access | |||||
| アクセス権URI | http://purl.org/coar/access_right/c_14cb | |||||
| 著者 |
重茂, 浩美
× 重茂, 浩美× 重茂, 克彦× 松下, 悟× 稲田, 敏樹× 重茂 浩美× 松下 悟 |
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| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | ［目的］我々は抗体に対するウイルスのエスケープ機構を分子生物学的に検討する目的で、マウスを宿主とする乳酸脱水素酵素ウイルス(LDV)をモデルとして解析を続けてきた。LDVは血中で抗体と感染性のある複合体を形成し、生涯にわたる持続感染を起こす事を特徴とする。感染マウス血清中にLDVエンベロープ蛋白VP-3（ORF5がコード）に対する特異抗体は存在するが、もう一つのエンベロープ蛋白であり、かつウイルス粒子内でVP-3とheterodimerを形成するM/VP-2 （ORF6がコード）に関してはその特異抗体の存在が不明のままである。前年度までの年会ではORF6蛋白恒常発現細胞株の樹立と抗M/VP-2特異抗体の作製について報告したが、樹立した発現細胞株では可溶性蛋白の回収率が低かったため多量の蛋白調整は困難であった。今年度はELISA等の免疫学的解析に必要な抗原を多量に調整する事を目的に、ORF6蛋白を組換えバキュロウイルスにて発現したので報告する。［材料と方法］LDV-C株感染マウス血漿より抽出したtotal RNAを鋳型としてRT-PCR法を用い、Hisタグを３’末に導入したORF6 遺伝子全長のtransfer vectorを構築し、baculovirus DNAと共にSF+細胞にco-transfectした。得られたrecombinant virusの 感染細胞培養液を感染48-120時間後に回収し、発現蛋白を抽出・精製してWestern blottingを行った。［結果・考察］組換えウイルスは3株得られ、2株の感染細胞培養液中にCBB 染色で検出可能な発現ORF6蛋白が存在した。分子量はnative なM/VP-2プラスHisタグのそれに相当した（23.5〜24 kDa）。蛋白の発現は感染後96時間目より認められ、最大の発現量は感染120時間後であった。現在、この発現蛋白を抗原としてWestern blottingとELISAにより感染マウス血清中でM/VP-2に対する特異抗体が存在するか否かを検討している。 | |||||
| 会議概要（会議名, 開催地, 会期, 主催者等） | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 第26回日本分子生物学会年会 | |||||
| 発表年月日 | ||||||
| 日付 | 2003-12-13 | |||||
| 日付タイプ | Issued | |||||
